這是一種特殊類型的明場光學顯微鏡，與相差顯微鏡有很多相似之處。要制作暗場顯微鏡，請在其下方放置一個暗場光闌，并在聚光鏡下產生一個空心錐形光束，該光束僅從樣品進入物鏡

該技術用于可視化未染色的活細胞。這是通過在樣品上進行照明的方式來實現的，因為當空心錐形光束傳輸到樣品時，偏斜的光線（未反射/未折射）不會穿過物鏡，而未折射的（反射/折射）會穿過物鏡。光線穿過物鏡到達標本，形成圖像。

這使得樣品的周圍區域顯示為黑色，而樣品將顯示為照明。這是由深色背景（即暗場顯微鏡）啟用的。

暗場顯微鏡的應用

• 它用于可視化較大細胞（如真核細胞）的內部器官
• 鑒定具有獨特形狀的細菌細胞，例如梅毒螺旋體（梅毒螺旋體）。